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實驗室培養基pH值監控的注意事項
點擊次數:509 更新時間:2023-07-11

pH值是培養基的常規監控項目,微生物的生長不僅依賴豐富的營養,還需要在適宜的pH值范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性,因此培養基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結果。


M-綠色酵母菌-霉菌培養.jpg

1、培養基配置:
配料—溶解—調PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存

1.配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。

2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調成糊狀
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。

4.過濾
濾紙或棉花進行過濾。(有時可以省去)

5.分裝
一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養,則100mL培養基/250mL的三角瓶,最多不能超過150mL培養基/250mL的
三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15-20mL培養基/250mL的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養基一般裝4-5mL,約試管的1/4高度;
固體斜面培養基一般裝3-4mL,約試管的1/5高度。

6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。

9.貯存
培養基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用

注意事項:
在配制時,首先要確保培養基未結塊、顏色未發生變化或其他物理性狀明顯改變;應按照使用說明上的要求操作,稱量應達到相應的精確度;純化水是配制培養基最常chang用的溶劑,應確保溶劑的質量符合要求;配制培養基應采用干凈且不會對培養基理化特性產生改變的容器。
在分裝前,應確保培養基wan全溶解混勻,加熱助溶是最chang用的方法,應注意不要過度加熱,尤其是含糖量較高的培養基,糖類不耐熱的特性會使糖類在高溫條件下產生有機酸而使pH值下降。

2、培養基的pH控制
培養基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。
雖然培養基中含有緩沖物質成分,能使培養基的pH盡可能的保持在要求的范圍內,但是配出的培養基若不符合要求,就要進行必要的調整。如果有已校準pH計,可用pH計,如果沒有,可用精密的pH試紙,再根據需要用1 moL/L氫氧化鈉或1moL/L鹽酸(微調可用0.1氫氧化鈉或0.1moL/L鹽酸)調制所需的pH。培基的pH一般為7.4~7.6,也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調整的需要高壓滅菌的培養基,在調整pH時要調至高出所需0.1個~0.2個單位,因用氫氧化鈉調整時,高壓滅菌后,培養基的pH要降低0.1~0.2。如培養基中含有碳酸鈣成分,可不pH。

3、pH電極的維護保養
目前,實驗室使用pH計電極大部分都是復合電極。其優點是使用方便,不受氧化-還原物質的影響,且平衡速度快。使用時應注意以下事項:
⒈復合電極不用時,可充分浸泡飽和lv化鉀溶液中。切忌用洗滌液或其他吸水性試劑浸洗。
⒉使用前,檢查玻璃電極前端的球泡。正常情況下,電極應該透明而無裂紋;球泡內要充滿溶液,不能有氣泡存在。
⒊測量濃度較大的溶液時,盡量縮短測量時間,用后仔細清洗,防止被測液粘附在電極上而污染電極。
⒋清洗電極后,不要用濾紙擦拭玻璃膜,而應用濾紙吸干, 避免損壞玻璃薄膜、防止交叉污染,影響測量精度。
⒌測量中注意電極的銀—氯化銀內參比電極應浸入到球泡內氯化物緩沖溶液中,避免電計顯示部分出現數字亂跳現象。使用時,注意將電極輕輕甩幾下。
⒍電極不能用于強酸、強堿或其他腐蝕性溶液。
⒎嚴禁在脫水性介質如無水乙醇、重鉻酸鉀等中使用

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