ELISA間接法和雙抗夾心法的原理與優缺點

　　一、間接法ELISA

　　原理：將抗原與固相載體相連結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。加入特異性一抗與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，加底物顯色。

　　優點：酶標二抗可加強信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標二抗可應用于多種不同的一抗；不直標一抗，可保留更多的免疫反應性；成本更低，使用標記抗體更少。

　　缺點：交叉反應幾率升高。

　　二、雙抗夾心法ELISA

　　原理：雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。加酶標抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。加底物反應。

　　雙抗原夾心法測抗體的反應模式與測抗原相似，用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。

　　優點：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的；適用于復雜樣品，抗原不需要進行純化即可用于檢測；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。

　　缺點：檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復表位；不適用于檢測小分子物質。