支原體又雙叒叕被污染了咋辦！
點擊次數：808 更新時間：2021-12-13
要說做細胞實驗大家最擔心的是什么，那應該就是——細胞污染了，而其中支原體污染是細胞培養實驗室重最常見、最“臭名昭著”的污染之一。
為什么這么說呢?
這是因為支原體污染幾乎可影響所有細胞生長參數、代謝及研究的任一數據，并且，支原體缺乏細胞壁，所以常規的抗生素并不能對它們起到抵抗作用，而且由于其直徑太小，濾菌器也無法過濾，所以，細胞一旦有支原體污染則十分難以被清除，會給我們的實驗造成極大的損失。
研究表明，細胞培養中有15-35%的細胞存在支原體污染，有些地區甚至高達80%。因此支原體檢測成為了細胞質控中*的環節，被列入《中國藥典》檢測的范疇。
細胞支原體污染的表現：
細胞狀態變差、生長變慢，在顯微鏡下觀察可能會有小黑點，但培養基一般不發生渾濁。細胞傳代以后就出現細胞間黑點，細胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細胞，最終細胞漂浮，*死亡。
支原體污染從何而來？
1. 已受污染的細胞;
2. 操作人員的疏失;
3. 已受污染的培養基、血清 ;
4. 操作環境不良、實驗器具不潔等。
檢測有無支原體污染可做如下檢查：
①相差顯微境檢測：將細胞按種于事先放置于培養瓶內的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察，支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察，鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。
③電鏡檢查：用掃描電鏡方法簡便快速，也可以利用透射電鏡。
④DNA分子條文檢查或支原體培養等方法：檢出率高，但方法較為復雜。
如果檢測到有支原體污染，該如何處理呢?
方法1：直接棄之!
這就非常簡單粗暴了，如果還沒做處理，還是趕緊棄之吧，搶救不如重新復蘇了，另外對培養箱要做由里至外的清潔處理。
方法2：使用支原體清除培養基
如果你培養的細胞比較珍貴，直接丟棄可惜，那么在確定對細胞的基因及蛋白表達沒有影響的情況下，可以使用——支原體清除培養基。
遠慕生物支原體清除培養基的優勢：
1，活性范圍廣：各支原體株系均可作用。
2，安全可靠：工作濃度低，無細胞毒性。
3，使用方便：將支原體去除試劑加入污染培養物即可，操作簡單。
4，時效快：使用的第二天可以明顯看出細胞內的小黑點變少，細胞狀態變好。
